ברצונך לאחות מחדר שנחתך בשתי קצותיו עם EcoRI עם פלסמיד שנחתך גם הוא עם אותו אנזים. אם ברצונך למנוע מצב שהפלסמיד יסגר ללא מחדר במהלך הליגציה יש להשתמש ב: