הכנה למבחן כימות חלבונים
- 203 שאלות
- 30 תגובות
- 0% הושלמו
- equalizer סטטיסטיקות
- share שתף
Discuss, Learn and be Happy דיון בשאלות
help
brightness_4
brightness_7
format_textdirection_r_to_l
format_textdirection_l_to_r
באיזה שיטה אפשר להפיק תאים בעלי חלבון ממברנלי מסוים ברמה סטרילית?
1
| done | ||
מיין לפי
מוניטין: 1
MACS (Magnetic-Activated Cell Sorting)
היא שיטה שמאפשרת:
מיון תאים חיים לפי ביטוי של סמנים חלבוניים על פני הממברנה (למשל CD4, CD8, וכו’).
שימור סטריליות מלאה – מתבצעת בצינורות סטריליים, ללא פגיעה בתאים.
קבלת אוכלוסיה מועשרת בתאים שמבטאים את החלבון הרצוי.
❌ למה לא האפשרויות האחרות?
Western blot – לא מאפשר מיון תאים, אלא זיהוי חלבון לאחר ליזיס של תאים (והרצה בג'ל).
Dot blot – גם שיטת זיהוי חלבונים, ללא הפרדת תאים.
Luminex – טכנולוגיה לזיהוי וכימות של חלבונים מומסים בתמיסה (כגון ציטוקינים), לא מיון תאים.
🧪 שימושים עיקריים של MACS:
הפרדת אוכלוסיות תאים ממערכת החיסון.
איסוף תאים לבדיקות downstream כמו RNAseq, FACS, או תרביות.
קבלת תאים סטריליים ונקיים ממזהמים.
מה היתרון של שימוש במיקרוסקופ קונפוקאלי על פני מיקרוסקופ פלואורסנטי רגיל?
1
| done | ||
מיין לפי
מה מייחד את שיטת אלייזה ישירה לתאים?
1
| done | ||
לא מצריכה נוגדן שניוני
נכון!
באלייזה ישירה, הנוגדן הראשוני מחובר ישירות לאנזים (למשל HRP), ולכן אין צורך בנוגדן שניוני.
זהו ההבדל המרכזי בין אלייזה ישירה לעומת עקיפה או סנדוויץ'.
? זו גם הסיבה שהשיטה פחות רגישה – כי יש פחות הגברה (רק נוגדן אחד עם אנזים, לא שניים).
❌ משתמשת בתאים נצמדים בלבד
לא מדויק.
אפשר להשתמש גם בתאים שאינם נצמדים, תלוי בעיצוב הניסוי (למשל, עם ציפוי אנטיגנים על פני שטח).
זו לא תכונה ייחודית לשיטת האלייזה הישירה.
❌ דורשת תגובה לומינסנטית בלבד
לא נכון.
אלייזה יכולה להשתמש במגוון סוגי תגובות:
צבעונית (colorimetric, כמו TMB עם HRP)
פלואורסנטית
לומינסנטית
ולא מוגבלת לתגובה לומינסנטית.
❌ מבוצעת עם תאים שלמים המדיפים חלבונים ישירות לבאריות
זה מתאר ניסוי של הפרשת חלבון לתרבית (secreted protein detection), אבל זה לא מאפיין בלעדי של אלייזה ישירה.
אפשר לעשות את זה גם באלייזה מסוג סנדוויץ', לדוגמה.
מיין לפי
מוניטין: 1
בשיטת ELISA ישירה (Direct ELISA):
החלבון או האנטיגן נקשרים ישירות למשטח הבארית.
משתמשים בנוגדן ראשוני שמסומן באנזים או בתג לומינסנטי.
אין צורך בנוגדן שניוני, ולכן התהליך קצר יותר ופשוט יותר.
לגבי שאר האפשרויות:
❌ משתמשת בתאים נצמדים בלבד – לא נכון, ELISA מתבצעת בדרך כלל על חלבונים מבודדים או דגימות נוזליות, לא בהכרח על תאים.
❌ דורשת תגובה לומינסנטית בלבד – לא נכון, ELISA ישירה יכולה להשתמש גם בתגובות צבעוניות (צבע), לא רק לומינסנטיות.
❌ מבוצעת עם תאים שלמים המדיפים חלבונים ישירות לבאריות – זה מתאים ל־In-cell ELISA או ELISA על תאים, לא ELISA ישירה הקלאסית.