גנטיקה מולקולריתת

מדוע נבחר דווקא האנזים Taq Polymerase לשימוש במכשירי ה-PCR?

1

שאלה #195880

		מכיוון שהוא מפיק אור פלורסנטי בעת סינתזת ה-DNA.
		הוא עמיד לחום ויכול לשרוד את שלב הדנטורציה (95 מעלות) ללא הריסה (דנטורציה של חלבון).
		מכיוון שהוא האנזים היחיד שחותך קצוות דביקים.
		כי הוא מסנתז DNA בכיוון 3' ל-5' בניגוד לאנזימים אנושיים.

אנזים זה נלקח מחיידקים תרמופיליים, ולכן אינו נהרס בטמפרטורה הגבוהה הדרושה להפרדת גדילי ה-DNA בכל מחזור.

מיין לפי

מהיכן הופק במקור האנזים Taq Polymerase?

1

שאלה #195881

		מתאי זרע של יונקים
		מנגיפי רטרו-וירוס.
		משמרים המשמשים באפייה.
		מחיידקים החיים בסביבות קיצוניות כגון גייזרים ומעיינות חמים.

האנזים הופק מחיידק בשם Thermus aquaticus החי במעיינות חמים, מה שמקנה לו עמידות גבוהה לחום.

מיין לפי

מה מתרחש בשלב ה-Denaturation (דנטורציה) במחזור ה-PCR, המתבצע בטמפרטורה של כ-95 מעלות צלזיוס?

1

שאלה #195882

		הפריימרים נקשרים לתבנית ה-DNA.
		הפולימראז מתחיל לבנות את הגדיל המשלים.
		קשרי המימן ניתקים ושני גדילי מולקולת ה-DNA המקורית נפרדים לגדילים בודדים.
		ה-DNA נחתך למקטעים קצרים על ידי חום.

החום הגבוה שובר את קשרי המימן שבין בסיסי ה-DNA, וכך מפריד את הסליל הכפול לשני גדילים בודדים שיהוו תבניות.

מיין לפי

מהו תפקידם של הפריימרים (Primers) בשלב ה-Annealing (איחוי) המתרחש סביב 55 מעלות צלזיוס ב-PCR?

1

שאלה #195883

		להשתיק גנים לא רלוונטיים במבחנה.
		להפריד את גדילי ה-DNA זה מזה באופן כימי.
		לתקן טעויות הגהה שעושה האנזים פולימראז.
		להיקשר לתבניות ה-DNA החד-גדיליות ולסמן לפולימראז היכן להתחיל ולסיים את סינתזת המקטע הרצוי.

הפריימרים הם מקטעים קצרים ומשלימים הנדבקים לקצוות המקטע שאותו אנו רוצים להגביר, ומהווים נקודת התחלה לאנזים.

מיין לפי

מה מתרחש בשלב ההארכה (Extension) המבוצע לרוב ב-72 מעלות צלזיוס במכשיר ה-PCR?

1

שאלה #195884

		הגדילים נפרדים שוב זה מזה.
		ה-Taq פולימראז מסנתז את הגדיל החדש על ידי הוספת נוקלאוטידים חופשיים המשלימים לתבנית.
		ה-DNA המיוצר נהרס כתוצאה מהחום הגבוה.
		הפריימרים מתפרקים ומוסרים מהמבחנה.

בטמפרטורה זו ה-Taq פולימראז פועל ביעילות מרבית ובאמצעות הנוקלאוטידים החופשיים בונה את הסליל המשלים.

מיין לפי

מדוע נדרשים לפחות 2 מחזורי PCR כדי לקבל לראשונה מולקולת DNA כפולת גדיל שהיא "בדיוק" באורך המקטע התחום על ידי שני הפריימרים?

1

שאלה #195885

		במחזור הראשון הסינתזה מתחילה בפריימר אך נמשכת עד קצה החוט (חיתוך מצד אחד), ורק במחזור השני, כשהגדיל החדש משמש תבנית, הפריימר הנגדי מגביל את הסינתזה (חיתוך משני הצדדים).
		כי האנזים פולימראז נח במהלך המחזור הראשון.
		בגלל שצריך לחכות שהפריימרים יתפרקו.
		משום שהדנטורציה הראשונה תמיד נכשלת.

בסיבוב הראשון אין נקודת עצירה טבעית בצד הנגדי לפריימר, כך שהחוט החדש ארוך מדי. בסיבוב השני, החוט שנוצר (המוגבל בקצה אחד) הופך לתבנית, והפריימר הנגדי מציב את הגבול השני.

מיין לפי

בהנחה שמתחילים ממולקולת DNA (מקטע יעד) דו-גדילית יחידה, כמה עותקים של המקטע צפויים להיות לאחר 30 מחזורי PCR עוקבים (הגברה אקספוננציאלית מלאה)?

1

שאלה #195886

		60 עותקים.
		30 עותקים.
		30^2 עותקים
		30^10 עותקים

בכל מחזור כמות ה-DNA מכפילה את עצמה. לכן הכמות היא 2 בחזקת מספר המחזורים

מיין לפי

למרות היעילות העצומה של ה-PCR, מדוע נהוג להגביל את מספר המחזורים (לרוב סביב 25-30) ולא לבצע עשרות רבות של מחזורים ללא הגבלה?

1

שאלה #195887

		משום שהמבחנות יימסו מהחום הממושך.
		ביצוע מחזורים רבים מדי יגדיל את "הרעש" ואת שגיאות הרפליקציה שהאנזים עלול לצבור, וכן יאזלו חומרי הגלם.
		כדי למנוע את הפיכת ה-DNA ל-RNA.
		כי אחרי 30 מחזורים האנזים משמיד באופן אקטיבי את כל מה שייצר.

מחזורים מרובים מעלים את הסיכוי להגברת טעויות, רעשי רקע, ומיצוי של הנוקלאוטידים והפריימרים במבחנה.

מיין לפי

מהו אחד היתרונות הבולטים של ה-PCR שהפך אותו למועדף על פני שימוש קלאסי ב-Probes מפלואורסצנטיים על כלל הגנום?

1

שאלה #195888

		הוא עולה מיליוני דולרים ולכן נחשב יוקרתי יותר.
		ה-PCR מתרחש בתוך הגוף החי ללא התערבות.
		אין צורך בציוד חשמלי כדי לבצעו.
		הוא מבצע הגברה ספציפית למקטעי ה-DNA הרצויים בלבד, חוסך את השימוש בפרוב, ומאפשר עבודה עם כמות חומר התחלתית זעומה.

ב-PCR מוגברות רק החתיכות שתחומות על ידי הפריימרים הספציפיים שמצאנו, וכך אין צורך "לדוג" אותן מתוך רעש של גנום שלם בעזרת גלאי.

מיין לפי

מהו המאפיין הייחודי של הנוקלאוטידים המשתתפים בריצוף DNA בשיטת סנגר (ddNTPs)?

1

שאלה #195889

		הם בעלי שינוי מבני מיוחד (חסרי קבוצת חמצן) הגורם לעצירה מיידית של סינתזת ה-DNA ברגע שהם מתווספים לשרשרת.
		הם זוהרים בחושך ללא שום ציוד חיצוני.
		הם אינם מסוגלים להיקשר כלל לתבנית ה-DNA וצפים במבחנה.
		הם מתחברים אך ורק לרצפי אינטרונים ב-DNA.

השיטה מבוססת על שילוב של בסיסים פגומים (ddNTPs). כאשר פולימראז משבץ אותם, השרשרת אינה יכולה להמשיך להתארך, ונוצר מקטע קטוע.

מיין לפי

Discuss, Learn and be Happy דיון בשאלות

מדוע נבחר דווקא האנזים Taq Polymerase לשימוש במכשירי ה-PCR?

מהיכן הופק במקור האנזים Taq Polymerase?

מה מתרחש בשלב ה-Denaturation (דנטורציה) במחזור ה-PCR, המתבצע בטמפרטורה של כ-95 מעלות צלזיוס?

מהו תפקידם של הפריימרים (Primers) בשלב ה-Annealing (איחוי) המתרחש סביב 55 מעלות צלזיוס ב-PCR?

מה מתרחש בשלב ההארכה (Extension) המבוצע לרוב ב-72 מעלות צלזיוס במכשיר ה-PCR?

מדוע נדרשים לפחות 2 מחזורי PCR כדי לקבל לראשונה מולקולת DNA כפולת גדיל שהיא "בדיוק" באורך המקטע התחום על ידי שני הפריימרים?

בהנחה שמתחילים ממולקולת DNA (מקטע יעד) דו-גדילית יחידה, כמה עותקים של המקטע צפויים להיות לאחר 30 מחזורי PCR עוקבים (הגברה אקספוננציאלית מלאה)?

למרות היעילות העצומה של ה-PCR, מדוע נהוג להגביל את מספר המחזורים (לרוב סביב 25-30) ולא לבצע עשרות רבות של מחזורים ללא הגבלה?

מהו אחד היתרונות הבולטים של ה-PCR שהפך אותו למועדף על פני שימוש קלאסי ב-Probes מפלואורסצנטיים על כלל הגנום?

מהו המאפיין הייחודי של הנוקלאוטידים המשתתפים בריצוף DNA בשיטת סנגר (ddNTPs)?

בקשה לשינוי התשובה / תיקון שאלה gavel

בקשה למחיקת השאלהmood_bad

בקשה לשינוי התשובה / תיקון שאלה

בקשה למחיקת השאלה