תגובות | ביוטכנולוגיה

Rotem Alony

כי צריך לקחת בחשבון גורמים נוספים?

לפני 3 חודשים

בינה תפעולית
בינה תפעולית

1

Rotem Alony

אבל איך זה הגיוני יש סהכ יותר מ60 דקות

לפני 3 חודשים

בינה תפעולית
בינה תפעולית

0

רומי עמיר

לאיזה ריאקציה מתייחסים... אין תמונה

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה חישובית2

0

Roy Agam

ב-Indirect Immunofluorescence (IF עקיף) משתמשים בנוגדן ראשוני שנקשר לאנטיגן, ולאחר מכן בנוגדן שניוני מסומן פלואורסצנטית שנקשר לנוגדן הראשוני. בזכות האפשרות לקשור מספר נוגדנים שניוניים לכל נוגדן ראשוני, נוצר אפקט של הגברת אות – מה שהופך את השיטה לרגישה יותר. למה שאר התשובות לא נכונות? א. הוא דורש פחות נוגדנים – לא נכון. דווקא נדרשים שני סוגי נוגדנים, מה שעלול לדרוש יותר נוגדנים מאשר IF ישיר. ב. הוא מאפשר לראות את האנטיגן בעין בלתי מזוינת – לא נכון. כל שיטות ה-IF דורשות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, לא ניתן לראות בעין רגילה. ג. הוא מהיר יותר – לא נכון. IF עקיף איטי יותר בגלל שלב נוסף של דגירה עם הנוגדן השניוני.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

בבדיקות PET (טומוגרפיה באמצעות פוזיטרונים) החומר הרדיואקטיבי הנפוץ ביותר הוא FDG – ראשי תיבות של Fluorodeoxyglucose, שהוא מולקולת גלוקוז שבה אטום אחד הוחלף באיזוטופ רדיואקטיבי של פלואור – F-18. תאים סרטניים צורכים גלוקוז בקצב גבוה, ולכן FDG מצטבר בהם יותר וניתן לזהות את מיקומם בבדיקה.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

MACS (Magnetic-Activated Cell Sorting) היא שיטה שמאפשרת: מיון תאים חיים לפי ביטוי של סמנים חלבוניים על פני הממברנה (למשל CD4, CD8, וכו’). שימור סטריליות מלאה – מתבצעת בצינורות סטריליים, ללא פגיעה בתאים. קבלת אוכלוסיה מועשרת בתאים שמבטאים את החלבון הרצוי. ❌ למה לא האפשרויות האחרות? Western blot – לא מאפשר מיון תאים, אלא זיהוי חלבון לאחר ליזיס של תאים (והרצה בג'ל). Dot blot – גם שיטת זיהוי חלבונים, ללא הפרדת תאים. Luminex – טכנולוגיה לזיהוי וכימות של חלבונים מומסים בתמיסה (כגון ציטוקינים), לא מיון תאים. 🧪 שימושים עיקריים של MACS: הפרדת אוכלוסיות תאים ממערכת החיסון. איסוף תאים לבדיקות downstream כמו RNAseq, FACS, או תרביות. קבלת תאים סטריליים ונקיים ממזהמים.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

Glypiation היא סוג של lipidation שבו חלבון מעוגן לממברנת התא באמצעות GPI anchor (Glycosylphosphatidylinositol) — מעין סוכר-ליפיד שמחבר את החלבון לממברנה. Lipidation רגילה היא עיגון חלבונים לממברנה דרך מולקולות שומן (כמו פרנילציה, מיאלינציה) ישירות על חומצות אמינו מסוימות בחלבון, ללא מעורבות של סוכרים. יתר האפשרויות: ❌ Glypiation משמשת בתאים צמחיים בלבד – לא נכון, מתרחשת בתאים של בעלי חיים גם כן. ❌ Lipidation תמיד זמנית – לא נכון, הרבה עיגוני ליפידים הם יציבים וארוכי טווח. ❌ אין הבדל משמעותי – יש הבדל מהותי במנגנון העיגון. לכן, ההבדל העיקרי הוא ש־Glypiation משתמשת במבנה סוכרי (GPI) לחיבור החלבון לממברנה, בעוד ש־lipidation רגילה משתמשת ישירות בקבוצות שומן.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

בליפידיזציה (Lipidation) יש מגוון סוגי ליפידים (כמו פרנילציה, מיאלינציה, GPI anchors) והם יכולים להיות מצורפים בכמויות שונות ובמיקומים משתנים על החלבון. בגלל הגיוון והוריאציה הזו, המסה הכוללת של החלבון משתנה בין מולקולות שונות, ומקשה על קביעה מדויקת של מידת הליפידיזציה רק לפי מדידת המסה המלאה. יתר האפשרויות: ❌ כל הליפידים דומים במסה – לא נכון, יש מגוון גדול של ליפידים שונים במסה. ❌ החיבור הוא זמני בלבד – לא תמיד; חלק מהליפידיזציות יציבות. ❌ לא ניתן לנתק את הליפידים מהחלבון – אפשרי במעבדות עם שיטות כימיות מסוימות

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

בשיטת ELISA ישירה (Direct ELISA): החלבון או האנטיגן נקשרים ישירות למשטח הבארית. משתמשים בנוגדן ראשוני שמסומן באנזים או בתג לומינסנטי. אין צורך בנוגדן שניוני, ולכן התהליך קצר יותר ופשוט יותר. לגבי שאר האפשרויות: ❌ משתמשת בתאים נצמדים בלבד – לא נכון, ELISA מתבצעת בדרך כלל על חלבונים מבודדים או דגימות נוזליות, לא בהכרח על תאים. ❌ דורשת תגובה לומינסנטית בלבד – לא נכון, ELISA ישירה יכולה להשתמש גם בתגובות צבעוניות (צבע), לא רק לומינסנטיות. ❌ מבוצעת עם תאים שלמים המדיפים חלבונים ישירות לבאריות – זה מתאים ל־In-cell ELISA או ELISA על תאים, לא ELISA ישירה הקלאסית.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

שיטת ברדפורד (Bradford assay) היא שיטת כימות צבעונית שנועדה למדוד את ריכוז החלבון בדגימה ביולוגית. מבוססת על שינוי צבע של הצבע Coomassie Brilliant Blue כאשר הוא נקשר לחלבונים. שינוי הספיגה באורך גל 595 ננומטר מאפשר לחשב את כמות החלבון באמצעות עקומת כיול. יתר השאלות: ❌ לזהות חלבונים ספציפיים ע"י נוגדנים – מתאים ל־Western blot / ELISA. ❌ לבדוק ניקיון חלבון – מתאים יותר ל־SDS-PAGE או כרומטוגרפיה. ❌ להפריד בין חלבונים בעלי משקל שונה – זו מטרת SDS-PAGE או Size-Exclusion Chromatography. לכן מטרת שיטת Bradford במעבדה היא כימות של חלבון — לא זיהוי ולא הפרדה.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

אשר רוצים להבדיל בין חלבונים בגודל דומה אך בהרכב חומצות אמינו שונה, יש צורך בשיטה שמפרידה גם לפי מטען וגם לפי גודל. SDS-PAGE רגיל מפריד רק לפי גודל (משקל מולקולרי), ולכן לא יספיק במקרה של חלבונים בגודל דומה. Size-Exclusion Chromatography גם היא מפרידה לפי גודל, לא לפי הרכב חומצות אמינו. קומסי בל (Chromatofocusing / Commassie Blue?) ייתכן והכוונה כאן לא ברורה — אבל אם הכוונה לצביעה כמו Coomassie Blue, זו רק שיטת צביעה ולא הפרדה. SDS-PAGE דו-ממדית (2D) כוללת: איזואלקטריק פוקוסינג (IEF) – הפרדה לפי pI (מטען כולל). SDS-PAGE – הפרדה לפי גודל.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

ניתן לדעת את המיקום המדויק של המודיפיקציה הסבר: ב-Western blot ניתן לזהות נוכחות של חלבון מסוים ואף לבדוק אם יש לו מודיפיקציה מסוימת (כמו זרחון) באמצעות נוגדן ייחודי למודיפיקציה. כמו כן, שינוי במסה יכול לרמז על מודיפיקציה, וניתן לבצע בדיקה חצי-כמותית לפי עוצמת הסיגנל. אבל — לא ניתן לדעת את המיקום המדויק של המודיפיקציה על החלבון. לשם כך דרושות שיטות אחרות, כמו Mass Spectrometry.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

היתרון בשימוש בווסטרן בלוט לאחר SDS-PAGE הוא: זיהוי ספציפי של חלבון באמצעות נוגדנים. הסבר: SDS-PAGE מפריד חלבונים לפי גודל בלבד, אך אינו מזהה איזה חלבון נמצא באיזו פס. ווסטרן בלוט מוסיף שלב של זיהוי באמצעות נוגדנים ספציפיים, שמאפשרים לזהות נוכחות של חלבון מסוים מתוך התערובת. התשובה הנכונה היא: זיהוי specific של חלבון באמצעות נוגדנים

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

Light Sheet Microscopy (או SPIM – Selective Plane Illumination Microscopy) היא שיטה אופטית מתקדמת שמאפשרת צילום תלת־ממדי של רקמות שלמות (כולל עוברי עכברים, איברים וכו') מבלי צורך לחתוך אותן לפרוסות. היא עושה זאת על ידי הארה של שכבות דקות (sheets), וכך מתקבלת תמונה תלת-ממדית עם שמירה על מבנה הרקמה – אידאלי לדימות מבנים אנטומיים וחלבונים בפיזור מרחבי. ❌ למה שאר התשובות שגויות: Light Sheet מאפשרת רזולוציה גבוהה יותר של חלבון גרעיני – לא ייחודי או עיקרון מייחד של Light Sheet. הרזולוציה לרוב פחותה ממיקרוסקופ קונפוקלי. Cryo-imaging לא מאפשר שילוב של חלבונים בצביעה כפולה – Cryo-imaging דווקא יכול לאפשר צביעות מרובות. Cryo-imaging דורש סימון עם לוציפראז בלבד – לא נכון. Cryo-imaging תומך גם בפלואורסנציה רגילה, לא רק לוציפראז.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

His-tag (תג היסטידין) הוא רצף קצר של חומצות האמינו היסטידין (בדרך כלל 6 – נקרא גם 6xHis), שמצורף לקצה של חלבון (למשל GFP) כדי לאפשר ניקוי (purification) פשוט ויעיל של החלבון. היסטידין נקשר בצורה חזקה ליוני ניקל (Ni²⁺) שנמצאים על גבי מצע כרומטוגרפי (למשל Ni-NTA resin). כך אפשר לבודד רק את החלבון המתויג מתוך תערובת של חלבונים בתא. ❌ למה שאר התשובות לא נכונות: מאפשר לחלבון להאיר באור פלואורסנטי – זו תכונה פנימית של GFP, לא של ה-His-tag מונע פירוק חלבון בליזוזום – אין קשר בין His-tag והגנה מפירוק משמש כאתר קישור לנוגדנים בפעולה של ELISA – His-tag לא משמש ל-ELISA, אלא לכרומטוגרפיה

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

טכנולוגיית CyTOF (קיצור של Cytometry by Time Of Flight) היא שילוב בין ציטומטריה של זרימה (Flow Cytometry) לבין ספקטרומטריית מסה, והיא מאפשרת ניתוח רב-סמני של תאים בודדים. במקום להשתמש בסמנים פלואורסצנטיים (כמו ב-Flow Cytometry רגילה), CyTOF משתמשת בנוגדנים שמחוברים לאיזוטופים של מתכות נדירות, שכל אחד מהם בעל מסה שונה. לאחר מכן, התאים מעובדים ומיוננים לפי זמן תעופה (TOF = Time of Flight) בספקטרומטר מסה, שמודד את המסות של המתכות שנמצאות על כל תא. ✅ כך ניתן לזהות עשרות חלבונים שונים בתא בודד, מבלי בעיית חפיפות ספקטרליות שקיימת בפלואורסנציה. ❌ שאר התשובות – שגויות: שימוש בפלואורסנציה לזיהוי חלבונים תוך תאיים – מתאר Flow Cytometry קלאסי, לא CyTOF מיון תאים על פי גודל בלבד – לא מדויק, וגם לא ייחודי ל-CyTOF חיבור בין נוגדנים ודנ"א עם ליגאז – אין קשר ל-CyTOF; זה רלוונטי אולי ל־Proximity Ligation Assay (PLA)

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

FLI – Fluorescence Imaging מאפשרת זיהוי ומעקב אחרי חלבונים באורגניזם חי, באמצעות תיוג פלואורסנטי של חלבונים (למשל חלבוני GFP או שימוש בצבעים פלואורסנטיים). השיטה לא דורשת הריגת בעל החיים, וניתן לבצע מעקב חוזר לאורך זמן באותו אורגניזם. ❌ שאר האפשרויות: Cryo-imaging – דורשת הקפאה עמוקה של הרקמה, ולכן הורגת את האורגניזם. Histology – עוסקת בחתכים מיקרוסקופיים של רקמות שנלקחו מאורגניזם מת. PET-CT – משמש לדימות של תהליכים פיזיולוגיים (למשל צריכת גלוקוז), אך לא לזיהוי ישיר של חלבון ספציפי, ודורש חומר רדיואקטיבי.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

הסבר: ליפידיזציה (Lipidation) היא מודיפיקציה פוסט-תרגומית שבה מצרפים לחלבון קבוצת ליפיד (שומנית), כמו: פָרְנֵסִילציה (farnesylation) מיריסטוילציה (myristoylation) פלמיטוילציה (palmitoylation) GPI-anchor (גליקוזיל-פוספט-אינוזיטול) המטרה של מודיפיקציות אלו היא בדרך כלל עיגון החלבון לממברנה (פלזמטית או תוך-תאית), משום שהליפידים הידרופוביים ונקשרים לאזורים שומניים של הממברנה. ❌ שאר האפשרויות: גליקוזילציה – משפיעה על קיפול, יציבות, ולעיתים על הכרה בתא, אבל לא בהכרח מעגנת לממברנה. אצטילציה – משפיעה לרוב על ביטוי גנים (למשל היסטונים), ולא על מיקום ממברנלי. פוספורילציה – משפיעה על פעילות ואינטראקציות של חלבונים, לא עיגון לממברנה.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

הסבר: ELISpot (Enzyme-Linked ImmunoSpot) מזהה תאים בודדים שמפרישים חלבונים (למשל ציטוקינים) על ידי קליטת החלבון המופרש על גבי ממברנה – כל כתם מייצג תא אחד מפריש. זוהי שיטה מאוד רגישה וכמותית לפעילות תאית. Flow Cytometry משמשת בעיקר לניתוח חלבונים תוך-תאיים או סמני פני שטח של תאים, באמצעות נוגדנים פלואורסצנטיים. כאשר רוצים לבדוק ציטוקינים, יש צורך לבצע תיקנון תוך תאי (permeabilization) כדי לזהות את החלבון בתוך התא, לפני שיצא ממנו. ❌ למה שאר התשובות שגויות: Flow Cytometry מזהה תאים לפי רמת DNA – לא נכון, השיטה מזהה חלבונים וסמני תא, לא DNA, אלא אם משתמשים בצביעת DNA מיוחדת (כמו PI), וזה לא רלוונטי כאן. ELISpot מזהה תאים נעים, Flow מזהה תאים קבועים – לא מדויק ואפילו הפוך לעיתים: ב-ELISpot התאים דווקא מקובעים בבארית, וב-Flow הם זורמים. אין הבדל – שתיהן שיטות מבוססות אנטיגן־נוגדן לזיהוי ציטוקינים – אמנם שתיהן משתמשות בנוגדנים, אבל ההבדל משמעותי מאוד בסוג המידע שהן מספקות: מיקום החלבון (מופרש vs תוך תאי), מספר תאים פעילים, ויכולת כימות.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

הסבר: שיטת ברדפורד (Bradford assay) מבוססת על הצבע Coomassie Brilliant Blue G-250, אשר משנה את הספקטרום שלו (אורך גל ספיגה) כאשר הוא נקשר לחלבון – בעיקר לחומצות אמינו טעונות חיובית (כמו ארגינין) ולחלבונים הידרופוביים. כאשר הצבע נקשר לחלבון, הוא עובר ממצב אדום (465 ננומטר) למצב כחול (595 ננומטר) – וזה מה שיוצר את הצבע הכחול שמודדים בספקטורופוטומטר. ❌ טעויות בתשובות האחרות: שחרור אלקטרונים מהחלבון – לא רלוונטי בתגובה זו ריאקציה עם נחושת דו ערכית – מתאר את שיטת BCA או ביורט, לא את ברדפורד נוכחות של קבוצות סוכר – לא מעורבות בשיטה, ברדפורד לא תלויה בגליקוזילצי

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

הסבר: בווסטרן בלוט (Western Blot) השלב הראשון הוא הפרדת חלבונים לפי גודל באמצעות SDS-PAGE, ואחר כך מועברים החלבונים לממברנה, שם ניתן לזהות חלבון מסוים באופן ספציפי באמצעות נוגדן ייחודי לו. יתרון מרכזי של השיטה הוא הספציפיות הגבוהה – ניתן לזהות חלבון מסוים מתוך תערובת מורכבת מאוד של חלבונים, בתנאי שיש נוגדן איכותי נגדו. פירוט שגוי של שאר התשובות: קבלת מסה מדויקת – SDS-PAGE מאפשר הערכה של גודל חלבון, אך לא מדויק כמו ספקטרומטר מסה. קבלת אינטראקציות עם חלבונים אחרים בזמן אמת – זה לא תפקיד של Western Blot, אלא שיטות כמו Co-IP או FRET. הרצת חלבון ללא השפעת מודיפיקציות – ההפך! SDS מפשט חלבונים ומבטל את ההשפעות של מבנה שלישוני ורביעוני, כולל חלק מהמודיפיקציות.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

Western blot – מבוססת על הפרדת חלבונים בג’ל (SDS-PAGE), העברתם לממברנה, ולאחר מכן זיהוי ספציפי באמצעות נוגדן ראשוני כנגד החלבון המבוקש. ➤ מאפשרת זיהוי איכותי וכמותי של חלבון מסוים מתוך תערובת מורכבת. שאר האפשרויות: Bradford – שיטה כללית לכימות סך החלבון, אינה מזהה חלבון מסוים. Gel filtration – שיטת כרומטוגרפיה להפרדה לפי גודל, לא מזהה חלבון מסוים. Coomassie staining – צביעה כללית של חלבונים בג’ל, לא ספציפית לחלבון מסוים.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

1. קריסטלוגרפיה בקרני X 🔸 שיטה מדויקת לזיהוי המבנה התלת-ממדי של חלבונים, כולל מיקום הקשרים הדיסולפידיים. 📌 לא מתאימה רק לזיהוי קיום – אלא לזיהוי מדויק של מיקום. 2. הפחתה עדינה באמצעות ריאגנטים כימיים ✅ נכון! שיטה זו (למשל שימוש ב-DTT או β-mercaptoethanol) גורמת לשבירת קשרים דיסולפידיים. אם מבצעים את הניסוי בנוכחות ובחוסר נוכחות של ריאגנט מחזר ומשווים – ניתן להסיק אם היו קשרים דיסולפידיים (למשל לפי שינוי בגודל חלבון בג’ל). 📌 השיטה לא מצביעה על המיקום, אבל כן על הקיום של קשרים כאלה. 3. NMR 🔸 שיטה לזיהוי מבנה מרחבי, בדומה ל-X-ray, אבל פחות מדויקת לקשרים דיסולפידיים, ודורשת תנאים קשים. 📌 לא שיטה פשוטה או אידיאלית רק לקיום קשרים דיסולפידיים. 4. סוניקציה עם SDS ❌ לא רלוונטית לקשרים דיסולפידיים. סוניקציה שוברת תאים ו-SDS הוא חומר דנטורנט שמפרק מבנה שניוני/שלישוני, אבל לא מפרק קשרים דיסולפידיים – אלא אם כן יש בו ריאגנט מחזר.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

הסבר: TNF-alpha הוא ציטוקין מסיס שמופרש מתאים (למשל מונוציטים). כדי למדוד את כמותו, משתמשים לרוב ב־ELISA או בשיטות דומות לכך שמבוססות על קיטים מסחריים שנועדו למדוד רמות של חלבונים מסיסים בנוזל (כמו סופרןנט). השיטות הלא נכונות: ❌ צביעת קומסי – משמשת לצביעת חלבונים בג'ל, אבל לא מספקת כימות ספציפי של TNF-alpha. ❌ Western blot – יכולה למדוד TNF-alpha, אבל בתוך התא ולא בהכרח את ההפרשה לסופרןנט. ❌ pH – לא רלוונטי למדידת רמות TNF-alpha. אם אתה רואה בתרגול שאלה כזו, תמיד חפש תשובה שמתארת כימות של חלבון מסיס בסופרןנט, וזה הכי מתאים ל־ELISA או קיט כימות מסחרי.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

1. שיטת Gating strategy ב־flow cytometry מאפשרת לנגד אונוכלוסיות האם על סמך ביטוי של גנים ספציפיים. ✅ נכון → ב־flow cytometry משתמשים ב־gating כדי לסנן ולזהות תאים מסוימים על סמך סמנים ספציפיים (כמו חלבונים על הממברנה או בתא, לרוב זוהרים), וזה מאפשר הפרדה בין אוכלוסיות תאים שונות. 2. מבחן ELISpot מודד את רמות החלבון בגודל בלבד, ללא התייחסות לתא שהפריש אותו. ❌ לא נכון → ELISpot הוא מבחן שמודד הפרשה של חלבונים ברמת התא הבודד, למשל ציטוקינים. רואים נקודה בכל מקום שתא הפריש בו את החלבון – ולכן הוא כן מתייחס לתא שהפריש. לא מודד "גודל" של חלבון. 3. בשיטת FluoroSpot ניתן לזהות בו זמנית האם שמפרישים שני ציטוקינים שונים בעזרת פלואורופורים שונים. ✅ נכון → FluoroSpot היא גרסה מתקדמת של ELISpot שבה משתמשים בפלואורופורים שונים לזיהוי הפרשת שני חלבונים שונים מתא אחד, וכך ניתן ללמוד על תאים רב-תכליתיים. 4. היסטולוגיה רגילה מאפשרת לוקליזציה של חלבון בתוך הרקמה אך מוגבלת לזיהוי של חלבון אחד בלבד. ❌ לא נכון → ניתן לזהות יותר מחלבון אחד – באמצעות צביעות אימונוהיסטוכימיות שונות, ואפילו שילוב של נוגדנים עם סמנים פלואורסצנטיים. אין מגבלה עקרונית לחלבון אחד בלבד. 5. בשיטת Light Sheet Microscopy, הרקמה נחתכת לפרוסות דקות כדי לאפשר חדירה של קרני לייזר. ❌ לא נכון → Light Sheet מאפשר הדמיה תלת־ממדית שלמה של דגימות שלמות (ולאו דווקא חתוכות) עם חדירה ממוקדת של קרן אור (sheet). אחת מיתרונותיה היא שניתן לבדוק דגימות שלמות מבלי לחתוך לפרוסות דקות. 6. Cryo-imaging של עכבר שלם דורש הקפאה וחתכים שלמים בסדרות עקביות של פרוסות רקמה. ✅ נכון → Cryo-imaging אכן מבוססת על הקפאת הדגימה ואז חיתוך מדורג לפרוסות, עם צילום של כל פרוסה, כדי לייצר תמונה תלת־ממדית ברזולוציה גבוהה. 7. בשיטת FLI (Fluorescence Imaging) ניתן לדחות חלבונים בעכברים חיים, בתנאי שהחלבון שקוף או חסר שייר שומן. ✅ נכון חלקית – סומנה כנכונה → FLI אכן משמש להדמיה של חלבונים בתאים או בעכברים חיים, אך תנאי ההדמיה תלויים באם החלבון סומן בפלואורופור ולאו דווקא אם הוא שקוף או חסר שייר שומן. לא ניסוח מדויק – אבל כנראה התקבל. 8. שיטת Salting Out מצליחה את העדות של חלבונים מסיסים יותר בריכוזים גבוהים של מלחים. ✅ נכון → Salting Out היא שיטה להפרדת חלבונים לפי המסיסות שלהם – חלבונים פחות מסיסים שוקעים ראשונים בריכוזי מלח גבוהים. לכן זה אכן תהליך מבוסס על שקיעת חלבונים לפי ריכוז מלח.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

שיטות כולורימטריות (כמו Bradford, BCA, Lowry) הן שיטות כימות פשוטות וזולות, שדורשות ציוד בסיסי בלבד (כמו ספקטרופוטומטר) וריאגנטים לא יקרים. לכן הן נחשבות לזולות ביותר. שיטות אנליטיות (כמו ELISA, Western blot, MS) הן לרוב יקרות יותר, בגלל ריאגנטים ייעודיים, נוגדנים, ציוד מתקדם, או זמן עיבוד. ELISA אינה תמיד יקרה יותר מ-MS. לעיתים קרובות, מס ספקטרומטריה (MS) נחשבת יקרה מאוד בשל הצורך בציוד יקר, תחזוקה, ומומחיות נדרשת. שיטות UV (כמו מדידת A280) הן למעשה מהזולות ביותר – לא נדרש ריאגנט, רק מכשיר קריאת UV – ולכן ההיגד ש"הן היקרות ביותר" שגוי.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

גליקוזילציה היא שינוי לאחר תרגום (PTM) חשוב מאוד שיכול: להשפיע על קיפול החלבון לשנות את משך החיים שלו בתא או במחזור הדם להשפיע על הזיהוי ע"י רצפטורים או נוגדנים לשנות את הפעילות הביולוגית או האפיניות לקולטן לכן, חלבון שיוצר בשתי מערכות שונות (למשל, תאי CHO מול תאי שמר) עשוי לקבל דפוס גליקוזילציה שונה – וזה יכול לשנות את היעילות או הבטיחות של הטיפול. שאר האפשרויות: ❌ פוספורילציה לא תקינה – פחות סביר להתרחש באופן משמעותי בין יצרנים, כי פוספורילציה היא לרוב זמנית ומבוקרת בתא, ולא תמיד חלק מהחלבון התרפויטי המיוצר. ❌ הבדל בליזיס – לא משפיע ישירות על החלבון עצמו, אלא אולי על נוכחות מזהמים, אך זו בעיית טיהור ולא שינוי בפעילות החלבון. ❌ אחוז גבוה של ליפידים – לא רלוונטי לרוב החלבונים הטיפוליים, אלא אם מדובר בחלבון ממברנלי, וגם אז – לא סביר שיגיע לחולה עם ליפידים במבנהו.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

הרחבה: ProQuantum משתמש בטכנולוגיית qPCR לזיהוי חלבונים, מה שמאפשר זיהוי כמויות מאוד קטנות של חלבון (רגישות גבוהה מאוד). הוא מתבסס על זיהוי של קומפלקס נוגדן-אנטיגן ויוצר תוצר DNA קטן, שאותו אפשר להכפיל ולמדוד ב-qPCR. העובדה שאין צורך בשטיפות (כמו באלייזה) מפחיתה רקע לא ספציפי, וכך משפרת את אות לרעש.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

הריצוף מתבצע בקצה ה-N (הקצה החופשי של קבוצת האמין) ולא מהקצה ה-C. השיטה שומרת את שאר השרשרת שלמה בכל שלב, ולכן ניתן לבצע מספר סבבים. מתאימה לרצפים קצרים (20–30 חומצות אמינו) – מעבר לזה היעילות יורדת.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

היתרון המרכזי של שימוש בטכנולוגיית ELISA מסוג סנדוויץ' (Sandwich ELISA) הוא רמת הספציפיות והרגישות הגבוהה שלה – מה שהופך אותה לשיטה המועדפת למדידת ריכוזים נמוכים של חלבונים, הורמונים, ציטוקינים ועוד, בדגימות ביולוגיות מורכבות (כמו סרום, פלזמה, תרביות תאים וכו').

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

. הפרדה של אוכלוסיות תאים שונות לדוגמה: להבחין בין לימפוציטים, מונוציטים ונויטרופילים על בסיס FSC/SSC (Forward Scatter / Side Scatter – מדדים לגודל וגרנולריות). או להבדיל בין CD4+ ל-CD8+ תאים T לפי ביטוי סמנים פלואורסצנטיים. 2. ניקוי רעשים או תאים לא רלוונטיים סילוק תאים מתים (באמצעות סמני viability). הסרת doublets (צמדים של תאים שנספרו כתא אחד). התמקדות רק בתאים ספציפיים (למשל רק תאי CD45+ שהם תאי מערכת החיסון). 3. כימות תתי אוכלוסיות מאפשרת למדוד כמה אחוז מכלל התאים שייכים לתת-אוכלוסייה מסוימת. 4. מעקב אחר ביטוי של סמנים ביולוגיים למשל: לבדוק כמה תאים מבטאים IL-2 או IFN-γ לאחר גירוי, באוכלוסיית CD4+ T בלבד.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

למה SDS-PAGE מדויק להערכת גודל? SDS יוצר יחס מטען-למסה אחיד, כך שהשפעת המטען של חומצות האמינו נעלמת. הדנטורציה מבטלת את השפעת הצורה המרחבית. לכן, ההפרדה תלויה כמעט אך ורק בגודל, כלומר במסה המולקולרית של החלבון.

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Roy Agam

מקורות נפוצים לפעילות HRP אנדוגנית: תאים שמכילים פרוקסידאזות טבעיות, כמו לויקוציטים (נויטרופילים, מקרופאגים). רקמות כמו כבד, טחול, כליה, מח עצם – המכילות אנזימים פרוקסידאזיים. למה זה חשוב? HRP משמש באנליזות רבות (כמו Western blot, אימונוהיסטוכימיה - IHC, ELISA ועוד) כ"סמן" שמחובר לנוגדן שניוני ומספק איתות בעזרת תגובה כימית בצבע או באור. אם ברקמה יש פעילות HRP אנדוגנית, היא יכולה: לגרום לרקע גבוה. ליצור false positives (תוצאה שנראית כאילו הנוגדן זיהה אנטיגן, למרות שזה רק פעילות אנזימטית טבעית של התא).

לפני 10 חודשים

כימות חלבונים
הכנה למבחן כימות חלבונים

0

Nalmas Khon

זה לא נכון.. מערכת דילוג ראשון של מאלאט אספרטט הוא התהליך שחשוב כדי להעביר אקוויוולנטים מהמיטוכונדריה לציטוזול.. התשובה הנכונה היא "חלקו יתבצע המיטוכונדריה וחלקו בציטוזול"

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה תיאורטית 2

0

Tal Zelazny

בדיוק

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה תיאורטית 2

0

justice for all

זה ג-יהיה ייצור של ATP פשוט ברמה נמוכה

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה תיאורטית 2

0

justice for all

הפופסונטזות מתחילות במיטוכונדריה ומסיימות בציטוזול אז שניהם אמור להיות

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה תיאורטית 2

0

Rotem Ben yosef

בדיוק

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה תיאורטית 2

0

justice for all

טעות..ברור שיכולים

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה תיאורטית 2

2

Yael Gluskinos

אני חושבת שהכוונה היא ל-A+D ? אחרת אין בזה היגיון...

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
בקטריופטג'ים

0

Yael Gluskinos

זה לא ממש נכון להגיד שלא ניתן, יש שימור גבוהה של חלבון הטרמינאז (החלבון שחותך את המטען הגנטי בזמן מילוי הקאפסיד) ומשתמשים בו לבדיקת קרבה גנטית בין פאג'ים.

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
בקטריופטג'ים

0

Nitzan Aharoni

בתנאים אנאירוביים הגליקוליזה היא היחידה שמייצרת אנרגיה ולכן הגוף עושה הרבה יותר גליקוליזה והתשובה הנכונה היא ״בתנאים אנאירוביים קצב גליקוליזה יהיה מהיר יותר״

לפני 10 חודשים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה תיאורטית 2

1

Nitzan Aharoni

צודק, התבלתי בגלל שזו תשובה נכונה. אבל שואלים פה איזה מהמשפטים *אינו* נכון, לכן התשובה שאמורה להיות מסומנת היא ״כל המוטציות מזיקות לאורגניזמים״.

לפני שנה

ביוטכנולוגיה
גנטיקה ביוט'

0

איתי

ניצן, זה לא נכון שלא כל המוטציות הן שינוי בDNA. זו למעשה, ההגדרה של מוטציה. (מצגת מוטציות, שקופיות 3-4)

לפני שנה

ביוטכנולוגיה
גנטיקה ביוט'

0

Nitzan Aharoni

יש כאן יותר מתשובה אחת נכונה. לא כל המוטציות מזיקות ולא כולן הן מתוצאה משינוי בDNA

לפני שנה

ביוטכנולוגיה
גנטיקה ביוט'

-1

Liza Karnilovich

זה תשובה נכונה

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

Majd Hjajra

התשובה נכונה

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

ים שמעוני

התשובה הנכונה

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

yaeli turtz

תוקן :)

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

Yael Gluskinos

התשובה הנכונה היא השתקת גנים מושרית ע"י וירוס VIGS

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

yaeli turtz

התשובה נכונה :)

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

yaeli turtz

תוקן :)

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

shoham shlomi

זו לא התשובה הנכונה, התשובה הנכונה היא נוכחות קוטיקולה עבה ושעווה אפידרמלית מחורצת.

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

Ilai Gabso

התשובה הנכונה זה עיבוד חוזר

לפני שנה

בינה תפעולית
בינה תפעולית

0

yaeli turtz

התשובה נכונה

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

yaeli turtz

התשבה נכונה

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

yaeli turtz

התשובה נכונה

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

yaeli turtz

התשובה נכונה

לפני שנה

עקות
עקות תל חי 2025

0

הראל קנדל

התשובה זה יכולה לזהות בוודאות

לפני שנה

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

Ido Oshriel

זאת חומצה אמינית לא?

לפני שנה

ביוטכנולוגיה
גנטיקה ביוט'

0

Matan Elias

התשובה אמורה להיות חיסון לפוליו

לפני שנתיים

וירולוגיה
וירולוגיה 2024

0

Aseel Ismael

צריך לחדד אם העילפון מרמות גבוהות של סוכר או רמות נמוכות כי הטיפול שונה

לפני שנתיים

סכרת
מחלת הסכרת

0

צביקה בלום

אפילו אנחנו יכולים להעביר בידיים אז למה דווקא טריפסים???? עד מתייייי

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

yotam oren

ההרכבה היא רוכב על כנה

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

2

צביקה בלום

חושב שלא...במקרה הזה הוירוס השתמר עוד בצמח האם ולא חדר אח"כ

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

צביקה בלום

אבל יש אחת כוללת יותר אז מן הסתם היא הנכונה

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

צביקה בלום

לא אמרו שוירוסים יודעים להשפיע על מוח של החרקים ואפילו לגרום לכנפיים שלהם להיות יותר ארוכות וככה הם יטוסו למרחקים גדולים יותר?

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

צביקה בלום

מלשון פריימר או בחירות פנימיות?

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

2

Tomer H

אני חושבת שהוא מתכוון למה ההגדרה להדבקה מכאנית

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

עמיאל שרחטון

גם פה אני חושב שהנכונה ביותר זה התשובה עם החיידקים והפטריות

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

עמיאל שרחטון

תלוי אם יש פריימריז אלחנן מדבר על זה בשיעור 10 תוך כדי השאלות

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

אמיר דרור

כן בגלל זה התשןבה הלא נכונה זה שהוא לא עושה שום דבר חיובי והוא כן עושה

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

1

אמיר דרור

זה תשובות שאלחנן כתב אז קשה להתווכח

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

Tamir Malul

גם העברה של וירוס באמצעות זרעים נגועים היא מכאנית

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

yotam oren

חמצן רדיקלי בכמות נמוכה לא עוזר לצמח להתמודד על הוירוס?

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

Tomer H

התשובות לפי אלחנןןןןןןן

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

Amit Gerty

התשובה הנכונה: לשעתוק של RNA על בסיס RNA

לפני שנתיים

מחלות בצמחים
מחלות ויראליות נ"שה

0

Eviatar Shulem

חלק מהחיסון המשולש

לפני שנתיים

וירולוגיה
וירולוגיה-2023

0

Donia Faris

לא נכון, לעיין במצגות של דורון טוב.

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית תל חי

0

Jordan Appel

במצגת 6 שקופית 28 רשום "כל מחזור קריאה איטי מאוד (5-10 דקות), אבל המקבילות מאפשר מהירות קריאת רצף גבוהה". אז התשובה הנכונה לא צריכה להיות ד?

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
מעבדה בגנטיקה מולקולרית

0

Guy Zakay

ברוב הטרנסאמינציות המולקולה המקבלת את החומצה האמינית היא אלפא-קטו-גלוטראט, לפי המצגת.

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה תיאורטית 2

0

Tor Nadav

די עם השטויות תתקני את זה

לפני שנתיים

מבוא לשפת תכנות R
מבוא לשפת תכנות R

4

Ekram Khateeb

גם וגם

לפני שנתיים

מבוא לשפת תכנות R
מבוא לשפת תכנות R

0

Rawan Abu Ahmad

למה 3 ? אם תסתכלו בהתחלה זה לוקח הנתונים ה גדולים מ 10 ולא שוואים אז אם יש מישהו בגיל 10 מפספסים אותו !

לפני שנתיים

מבוא לשפת תכנות R
מבוא לשפת תכנות R

2

Rawan Abu Ahmad

למה לא typeof()?

לפני שנתיים

מבוא לשפת תכנות R
מבוא לשפת תכנות R

1

Mariam Fattali

התשובה נכונה, הכוונה כאן שמנוח צמוד אומר שאין העברה לאלקטרונים דרך השרשרת במצב של חוסר אינרגה

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה חישובית2

1

Tomer H

לדעתי זוהי טעות מאחר שהפרת צימוד משמעותה הולכת אלקטרונים ללא ייצור ATP. אבקש לשנות את התשובה בהקדם. תודה מראש, תומר.

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
ביוכימיה חישובית2

1

אביב אוחיון

אז איזו תשובה נכונה?

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
מעבדה בגנטיקה מולקולרית

0

Geniya Zabudka

לאאאאאא מפתאום

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית#$

0

Shay Kaduri

אמיל רסקין צודק ,יש על זה שקופית במצגת

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית#$

0

אלה מנחם

התשובה הנכונה: A קורלציה עם עור בהיר וG קורלציה עם עור כהה

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
מעבדה בגנטיקה מולקולרית

0

איתן שלמה כהן

בסיכום ראיתי שזה בא כהוכחה לEARLY INTRONS, משמע שרוצים לומר שלא נוספו אלא היו שם מאז ומעולם ורק ירדו. אבל לא בטוח

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית#$

0

מור שלוש

מישהו הבין מה זה גלאי כרומולוגי?

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית#$

0

Geniya Zabudka

זה לא נופף, זה נוסף

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית#$

0

Geniya Zabudka

אמיל רסקין שלמד הרבה טוען שזה ג׳, אני מצדד בו, נשמח לשמוע עוד דעות

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית#$

1

עמית הלל

כנראה שהכוונה לאינטרונים (הלא מקודדים) ביחס לאקסונים (שכן מקודדים)

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית תל חי

1

Yael Gluskinos

התשובה הנכונה בתכלס היא 1+2 כי ביצורים הפלואידין מוטציה כזו תבוא לידי ביטוי כאשר קיימות שתי מוטציות על האלל היחיד שיש להם...

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית#$

0

Amit Naaman

לא הוגן! עם התיבה המסומנת נכונה, ומתייחסים שם גם למשפט 2 וגם למשפט 4, מדוע אם כך צריך לסמן גם את התיבה המתייחסת רק למשפט 4?!

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
מעבדה בגנטיקה מולקולרית

0

Amit Naaman

זה נכון לגבי סוג צבע העור ולא צבע העיניים

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
מעבדה בגנטיקה מולקולרית

1

Geniya Zabudka

באמת יש קישור של הרפרסור אבל מאחר ויש הרבה טריפטופן בתא אז יש הרבה טריפטופן לחבר לtRNA ואין עיכוב באיזור 1. כן יש עיכוב בלולאה באיזור 3,4

לפני שנתיים

ביוטכנולוגיה
גנטיקה מולקולרית#$

1